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开发一种生物荧光检测HIV病毒载量监测
      
  以下三种通用的方法是目前在发展中国家来检测和量化HIVRNA的可供选择:反转录聚合酶链反应(RT-PCR),核酸序列的扩增(NASBA),和支链DNA(的bDNA)。每一种方法需要三个步骤:样品制备和病毒核酸的提取,从检测对象的病毒RNA,并检测和/或扩增产物定量所产生的靶核酸序列或信号放大6RT-PCR使用反向转录酶转化病毒RNA到互补DNA(cDNA),然后复制,因此可以被检测到。在该方法中,RT-PCR定量HIVRNA,使测定病毒负荷。6是NASBA扩增的等温方法,其中,靶RNA是由3-酶系统放大,并通过竞争性共扩增的控制量化。这种方法消除了对所使用用于RT-PCR的热稳定酶和热循环仪器。-PCR),核酸序列扩增(NASBA)和支链DNA(的bDNA)。对照品
  RT-PCR使用逆转录酶酶病毒的RNA转化为互补DNA(互补),然后复制,因此可以被检测到在这种方法中,RT-PCR量化艾滋病毒的RNA,使病毒载量的决心,目前,以下四个市售的病毒载量检测所有使用这些通用的方法之一:科瓦斯AmpliPrep和科瓦斯的TaqManV2.0由罗氏分子系统,实时HIV-1由Abbott实验室,Versant的HIV-1RNA1.0试验(KPCR)由西门子医疗诊断和的NucliSENSEasyQHIV-1v2.0顺次生物梅里埃公司。4,6科瓦斯的TaqManHIV-1的COBASTaqMan探针的HIV-1检测是一种体外核酸目前,以下四个商用病毒载量分析所有一般使用其中的一个方法:科瓦斯AmpliPrep和科瓦斯的TaqMan2.0罗氏分子系统,实时的HIV-1由雅培公司,熟练的HIV-1RNA的1.0测定(KPCR)西门子医疗诊断,和的NucliSENSEasyQHIV-1V2.0梅里埃。
  扩增检测为HIV-1RNA在人类血浆中使用的COBASAmpliPrep仪自动试样处理和自动化的扩增和检测的COBASTaqMan探针分析仪或科瓦斯的TaqMan48分析仪定量。这是一个完全自动化的,实时PCR系统为目标的HIV基因组,从而导致检测的下限双方的插科打诨和LTR地区。6的COBASTaqMan探针HIV-1的检测只需要一定的技术技能,具有较宽的动态范围,是完全自动化(包括样品转移),并且只需要分析一个单间,但它也有一些缺点。为了进行的COBASTaqMan探针的HIV-1检测,一些专用的实验室空间和设备是必需的,适度的技术支持是必不可少的。该设备也是昂贵的,通常是超出了任何发展中世界的设施,可提供空间和支持的范围。6实时HIV-1。雅培实时HIV-1检测采用实时荧光定量PCR,但不像TaqMan探针,它的目标是在POLHIV基因组的整合区域。HIVRNA定量是使用m2000sp样品制备和核酸的提取,并m2000rt用于扩增和检测的自动化流程。6雅培实时检测的主要优势包括其高吞吐量,大动态范围,而事实上,它可以是完全自动化的,封闭的系统中的PCR。此外,该设备可用于评估HIV之外的其他病原体。然而,与的COBASTaqMan探针,该系统需要专用的设备和空间,良好的技术支持,并有相当的资金投入。6Versant的HIV-1RNA的1.0。的Versant的HIV-1RNA1.0试验(的bDNA)是一种自动检测该还针对HIV基因组的聚合酶整合区域,使用样品准备模块和扩增/检测模块一次。6的Versant的测定法也具有高吞吐量和可以完全自动化,从而降低污染的风险较放大试验定量的HIV-1RNA在人类血浆使用科瓦斯AmpliPrep仪器自动标本处理和科瓦斯的TaqMan分析仪或科瓦斯的TaqMan48分析仪自动放大和检测。
  目前的商用实时HIV病毒载量测定的表一,主要特点。(点击图片放大。)表一,当前商业实时HIV病毒载量的主要特征分析。(点击图片可放大)。PCR反应。没有特殊的实验室设置,或单独提取区域是需要的,并且该设备还可以用于评估其他病原体。然而,Versant的检测的主要缺点包括需要熟练的技术人员,良好的技术支持和财政资源。6的NucliSENSEasyQ。的的NucliSENSEasyQHIV-1的2.0版使用NASBA为目标的gag区扩增艾滋病毒和定量核糖核酸(见表I)。该测定游NASBA与实时检测通过使用利用的NucliSENSEasyQ分析仪分子信标。9的的NucliSENSEasyQ分析提供高吞吐量的优势与需要的唯一介质技能。它也是一个完全自动化的,封闭的系统。但是,它需要专门的空间和设备,并且有污染的高容量的实验室危险。技术支持是必需的,增加了与此相关的试验已经很高的成本.
  NucliSENSEasyQ分析提供高吞吐量的优势只有中等技能要求。这也是一个完全自动化的,封闭的系统,然而,它需要专用的空间和设备,有一个大容量实验室的污染风险。技术支持是必需的,已经增加了高成本相关的分析。6
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