购买时请注意选择相应的产品名称
| 检测蛋白酶的侧流试验使用彩色粒子酶 | |||
|---|---|---|---|
|
一个横向流酶分析格式,它使用非议员如颜色或荧光粒子。 一种酶底物是共价标记与一个特定的绑定我(B1)和一个彩色粒子使一个衬底共轭。 没有一种酶,粒子被第二粘合剂(B2,B1特有的),是在捕获带我上固定一个II型横向流装置来显示一个强烈颜色信号。 捕获区二世应该显示要么没有信号或弱信号捕获能力是否捕获区我的衬底共轭是超过总额的衬底共轭。
在存在一种酶,劈开了衬底,一些或所有的B1将释放的粒子。 发布的B1可以流的速度比基质配合来绑定与B2在捕获区I .此外,消化或部分消化底物轭合物将会有更少的B1根;因此,他们将有更少的或没有可能被捕获的B2在捕获区我产生一个较弱的信号或无信号。 的消化或部分消化底物轭合物通过捕捉带我而被多熔素在捕获区二世来显示一个强烈的信号。
演示的原理分析格式在图4中,生物素酪蛋白bp准备作为衬底共轭对SG metalloprotease从。 图5显示了开发测试带分析样品中掺入metalloprotease的0至40摄食ng。 在缺乏metalloprotease,衬底轭合物捕获在捕获区我的类型我条来显示一个强烈的信号。 捕获区二显示没有信号,因为所有的衬底轭合物被捕获在捕获带我。
在存在0.5 -40 ng的metalloprotease,酶消化底物轭合物释放一些生物素分子,以便衬底轭合物有少或无生物素根。 生物素分子的释放和生物素根仍然附着在基片配合参加抗生物素抗体在捕获带我来产生一个弱的蓝色信号,而一些消化或部分消化底物轭合物通过捕捉带我和被束缚在捕获区II产生一个更强的蓝色信号。
当使用metalloprotease 40 ng的,所有的生物素根被释放从衬底轭合物,没有更多的生物素是附加到蓝色粒子。 颜色的强度在捕获区我的身体非常虚弱,和蓝色的颜色强度在捕获区二世是强大的。 一般来说,颜色强度的降低,捕获区我的颜色强度的捕获区二增加的数量在增加。样品的蛋白酶
图6。 剂量反应曲线metalloprotease检测(Y轴:比例反射率,I2 /(I1 + I2))。
颜色强度捕获区I和II可以提供半定量或定量测量量的甚至活性酶。 反射强度的同时捕获区I和II测量使用一个内部开发的扫描仪。 图6显示了反射率的捕获区二世(I2)捕获区域的总和I和II(I1 + I2)作为一个函数的数量在一个示例。metalloprotease 剂量反应曲线显示了良好的线性相关关系强度和量的反射率蛋白酶前饱和。
结论
本文演示了改编的侧流格式检测活跃的酶。 横向流酶测定技术保留的所有好处LFIA如简单,用户使用方便,成本低。 尽管当前的研究集中在检测酶涉及债券劈理,分析技术可以适用于酶参与债券形成和构象异构化。 除了检测酶,测定技术也应该用于检测任何分子物种参与酶反应,如酶抑制剂。 这些技术应该找到各种现实世界的应用,如POC和场外测试阴道酵母菌感染(使用spartyl蛋白酶作为生物标志物)和慢性伤口(使用蛋白酶从细菌病原体作为生物标记)。
引用
1。 G Posthuma-Trumpie,J Korf,和一个Amerongen,“双金纳米粒子共轭基础侧流试验(LFA)方法分析肌钙蛋白I、“分析、生物分析化学393(2009):569 - 582。
2。 D布鲁克斯,et al。,“快速、定量全血检测试纸快速检测平台”,临床化学,45(1999):1676 - 1678。
3。 RG大梁,“定量检测分析物检测试纸条上,“美国专利5569608(1996)。
4。 H郭和拉Meritt,”法测定分析物浓度在侧流免疫表现出高剂量的三明治钩效应”,美国专利6183972 b1。
5。 CR桑顿,交流Groenhof,R福勒斯特,“一步法,检测试纸的侧流装置特定于Rhizoctoniasolani和某些相关的物种,其用于检测和量化R .龙葵在土壤中,“植物病理学94(2004):280。
6。 莱托兰伯特和是费舍尔,“诊断化验包括多路复用侧流免疫测定量子点,”美国专利申请20050250141 a1(2005)。
7。 X的歌,“横向流化验使用时间分辨发光,“试管技术15,没有。 4(2009):31 37。
8。 X的歌,“膜侧流试验装置,利用磷光检测,”美国专利申请20050112703 a1(2005)。
9。 C Feistel”,系统和方法来执行磁色谱分析,“美国专利6136549(2000)。
10。 哈伯勒尔,et al。,”拉曼主动侧流装置和检测方法,”美国专利申请20070059203(2007)。
11。 P Corstjens,et al。”,使用升频转换荧光粉记者在横向流分析来检测特定核酸序列:一种快速、敏感的DNA测试,以确定感染人类乳头瘤病毒16型”,临床化学47(2001):1885 - 1893。
12。 X毛泽东,et al。,“一次性核酸生物传感器基于金纳米探针和侧流带,“分析化学81(2009):1660 - 1668。
13。 Y总裁et al。,“发展寡核苷酸侧流免疫分析法对多参数检测、《免疫学方法258(2001):73 - 84。
14。 j . Naglik,et al。,“白色念珠菌分泌天门冬氨酰Proteinases在毒力和致病,“微生物学154(2008)3266 - 3280。
15。 J Naglik,S和B Challacombe,Hube”,Proteinases Sap1 Sap2分泌天门冬氨酰,造成组织伤害一个体外模型的阴道Candidias基于重组人类阴道上皮,“微生物学和分子生物学评论》67(2003):400 - 428。
|
| 上一篇：酶底物是由一个酶催化生成一个或更多的产品 | 下一篇：造父变星挣谁支持结核快速测试 |
|---|
无法在这个位置找到： xy/left.htm