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BART发光的分子诊断概述
      
  BART是一个发光的分子诊断,可以减少仪器的成本和开拓新的应用,在资源贫乏的诊断和疾病监测报告系统。只需要一个单一的高温加热块和一个光电二极管的光检测系统,BART被设计用于与等温核酸扩增的技术(iNAAT)。它结合了简单和坚固的化学和技术在实时,闭管分析(需要最小的电输入端和温度调节),和不太苛刻的样品制备。BART几个当前可用的系统和其他系统的后期发展相比具有优势,并可以提高在发展中国家的艾滋病患者病毒载量监测。
  BART点关心分子诊断系统。在分子诊断通常使用的iNAATs,的产生的扩增子以指数速度。其结果是,焦磷酸(PPi)的扩增子生产的一种副产物,也产生成倍增长。通过链接的指数生成的焦磷酸,三磷酸腺苷(ATP)的合成,它是可以使用的程度定量扩增通过(参见图1)发射的光的荧光素酶报告的萤火虫荧光素酶的热稳定版本。因为BART技术如下的过程,而不是绝对测量的浓度的变化率,它是鲁棒不同样品类型和宽容大量的脱氧腺苷三磷酸(的dATP,萤火虫萤光素酶的底物)和相当数量的污染ATP的和PPi 11
  热稳定的荧光素酶的使用是必不可少的的BART技术,自大多数iNAATs操作在在50°至65°C。迄今为止,BART已集成一些基于等温iNAATs的使用如Bst多DNA聚合酶的链置换聚合酶11的某些方法所固有的特异性是如此之高,这是足以跟随焦磷酸生产推断的靶分析物特异性扩增。
  看出,在荧光的方法中,首先是随着扩增的进行,随后迅速下降时,焦磷酸的浓度上升到目前为止发光的大量增加,成为抑制是非常不同的从BART记者系统的光输出萤光素酶反应(参见图1)。这种不寻常的性质,BART输出使人们有可能确定结果已经完成,而不需要复杂或高度敏感的光探测器。达到这个峰值的光发射所需要的时间是在样品中的靶核酸的量成反比。因此,BART作用定量时的结果已经显示出类似的快速PCR系统(参见图2a和2b)。
  BART的优点BART试验可以实时跟踪,允许定量分析,并在一个封闭的容器格式中进行,从而减少了污染的危险。的BART生物化学装置的独特性质,结果可检测使用一个简单的光检测系统(例如,光电二极管),有利于及早检测和决策不需要一个昂贵的,高灵敏度的光检测装置(参见图3) 。BART技术已被证明是更宽容的DNA聚合酶用于iNAATs,是一个事实,即以共同抑制剂的影响较小减处理的样品中,由于。同样,也可以分析样品的固有荧光或混浊,这是一个问题的其他方法,
  这些特性可让简单的协议,作为一个整体对特定的测试要建立。例如,磁性粒子已被用于特定的捕获的DNA,也没有必要从有孔玻璃珠,以洗脱DNA,用PCR扩增,然后再尝试。相反,可以直接加入珠粒的BART试剂,可以容忍的存在下
  磁珠。这种增强的样品宽容意味着可以简化样品制备的优势,在资源有限的环境和具有挑战性的物理环境中(见表二)。
  BART是非常适合高通量应用,它同样适用于高度分散的设置和集中需要高通量技术的实验室。硬件也是便携式电源或电池供电,最终在一个低成本的单位具有占地面积小,可用于在具有挑战性的环境,包括非实验室环境。在本质上,BART的设计是基于实验室的分子诊断系统的笔记本电脑相当于(参见图3)。
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