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强大的新的化学发光过氧化物酶底物
      
  根据在新的基板上表现出创新的检测试剂在四个数量级的过氧化物酶的线性响应,并达到峰值强度在溶液中以秒为单位。哈希姆AKHAVAN Tafti,威廉·G·克里普斯,雷努卡DeSilva酒店,文化谢罗伯特A. Eickholt,理查德S.汉德利,朗达·林斯基,Michael E. Mazelis的,A.保罗Schaap物Lumigen公司(位于Southfield,MI)的PS-阿托基板与辣根过氧化物酶的反应产物的发光。辣根过氧化物酶(HRP)的两种最常用的酶标记物在医学诊断和研究中的应用,另一个是碱性磷酸酶(AP)的辣根过氧化物酶免疫测定法,核酸杂交测定中经常应用,部分原因是由于准备可用的过氧化物酶结合的抗体的半抗原,例如生物素,异硫氰酸荧光素,地高辛。采用基于HRP催化化学发光检测,自动分析的VITROS免疫诊断体系的邻临床诊断公司(力登,NJ),是在商业用途。辣根过氧化物酶相对于AP的更小尺寸的装置中的结合物,它的使用应该是不易发生固体表面的非特异性结合。一个较小的标签酶使酶抗体结合物具有免疫识别干扰的可能性较小。 尽管HRP为一个标签,化学发光检测试剂酶存在相对 ??较少的优势。新试剂参展提高了灵敏度,宽动态范围,速度,方便用户使用,将有助于把握作为一个标签HRP酶的好处。
  大多数目前使用的试剂包括环状酰肼鲁米诺作为基板,以及增强剂(参见图1)。2一类新的过氧化物酶检测的化学发光试剂的前面所述。2在这些试剂,包括PS-1和PS-3从物Lumigen公司(密西根州Southfield),包含9,10 -二氢吖啶基板,经过氧化酶产生化学发光吖啶酯。吖啶酯反应的试剂,形成不稳定的dioxetanone中间体(参见图2)的过氧化氢 ??中存在。试剂配方并入增强子加速并延长酶促氧化的9,10 -二氢吖啶基板。术语“衬底”的使用并不严格HRP检测试剂的动作。而实际的机制被认为是更复杂的比典型的酶 - 底物反应。
  唯一的物种与酶反应,直接在其静止状态下,供给的过氧化氢可以以游离形式或作为一个复合物,例如过氧化脲,过硼酸盐,或盐percarboxylate。辣根过氧化物酶与过氧化氢源的查询结果减少过氧化氢氧化钾和氧化酶的两个较高氧化态的中间体的反应。氧化的中间体氧化增强剂在单电子的过程中,增强作为电子继电器。氧化增强剂,反过来,所谓的基板,其中,在氧化时,与过氧化氢或分子氧形成的化学物种反应氧化。增强减少回其原生状态的过程中,,准备调解进一步氧化acridan。
  几种物质是已知的作为过氧化物酶介导的氧化反应的促进剂的功能。无数的具有酚基团的化合物是有效的,作为芳族胺,某些杂环化合物,特别是苯并噻唑,和芳基硼酸。4,5的最后一组的化合物可能通过转换苯酚通过与过氧化氢 ??反应原位。
  增强剂的有效性似乎是主要根据其氧化电势,在反应条件下,可检测基片的氧化电势的关系。6促进过氧化物酶的活性增强剂,同样适用于显色,荧光,和luminogenic的反应过程中,由于它是上游的最终检测反应是至关重要的电子转移过程。然而,新发现的过氧化物酶催化反应必须进行仔细的优化方面促进剂的选择和浓度。
  过氧化物酶的化学发光检测试剂都是经过精心优化多元的解决方案。典型的配方的来源,包括过氧化氢,在基板,一种或多种促进剂,表面活性剂,和其他专有组件在一个缓冲区中。他们往往必须提供两个组件。
  此外,必须每天工作溶液,因为有限的底物/增强剂/过氧化氢混合物的贮存稳定性。这些组件之间的反应速度慢,在过氧化物酶的情况下,可能会导致不可接受的高的试剂空白和反应物的消耗。需要准备的新鲜的工作溶液,这些试剂的使用,特别是在自动分析系统的复杂性。
  然而现在,一个强大的新家族的化学发光检测试剂为HRP已开发的物Lumigen。这些试剂中的两个已经被商业化:PS-阿托检测在溶液中检测和TMA-6印迹应用。,这些试剂的最显着的特性是他们的能力,要被存储在一个单一的容器中准备使用的解决方案。储存至少3周的工作溶液在室温下长达4个月,在4℃下已经看到,不会导致性能的下降。
  新的试剂,这是基于一个全新的不同的基板上,在5个数量级的线性响应表现出过氧化物酶。6分钟后,加入辣根过氧化物酶的解决方案所用试剂高原的光强度的测量导致在酶浓度在5个数量级的线性校准曲线的。另外一个特点是,化学发光发射的发展非常迅速地与其他衬底相比,在不到1分钟内达到在溶液中测定的峰强度。调查这些试剂的能力,在这篇文章中报道。
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